放射性核素（125Ⅰ/13Ⅱ）标记新型c（RGD）2非小细胞肺癌显像和治疗的实验研究

【摘要】第一部分125I-c(RGD)2肽与肺腺癌细胞A-549的结合、在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究目的：通过放射性核素125I标记的新型c(RGD)2与肺腺癌A-549细胞的结合、125I-c(RGD)2肽在荷人肺腺癌裸鼠的体内分布及荷瘤裸鼠SPECT显像，旨在探讨其作为整合素αvβ3受体高表达的恶性肿瘤显像剂的可能性，为进一步研究其对肿瘤的治疗提供实验依据。方法：①氯胺T法标记c(RGD)2肽与放射性化学纯度测定；②测定125I-c(RGD)2肽的稳定性：在室温(25±2)℃和37℃时，将制备的125I-c(RGD)2肽分别置于0.9%生理盐水和人血清中，孵育不同时间；③测定125I-c(RGD)2肽与A-549细胞的结合率：取A-549细胞悬液调整细胞密度至1×106个/mL，将细胞按1×106个/孔接种在六孔板上，加入3.7KBq(50μL)125I-c(RGD)2肽，分别于1h、2h、4h、8h、16h、24h收集上清，用γ测量仪测量细胞的CPM计数(B)及上清液的CPM计数（F），125I-c(RGD)2肽的细胞结合率(%)=[B/(B+F)]×100%；④建立荷肺腺癌A-549裸鼠模型；⑤125I-c(RGD)2肽在荷人肺腺癌裸鼠的体内分布：选取荷瘤裸鼠24只，采用随机数字表法分为6组，每组4只。采用尾静脉注射125I-c(RGD)2肽，分别于注射后1h、2h、4h、8h、16h、24h取各组裸鼠脏器和肿瘤组织，测量每克组织百分注入剂量（%ID/g）及肿瘤组织与非肿瘤组织的比值(T/NT)；⑥125I-c(RGD)2肽在荷人肺腺癌裸鼠的SPECT显像研究：选取荷瘤裸鼠15只，采用随机数字表法分为5组，每组3只。采用尾静脉注射125I-c(RGD)2肽，另取0.05mL125I-c(RGD)2(放射性活度为1.036MBq～1.92MBq)做标准源，分别于注射后1h、2h、4h、8h、24h进行SPECT平面显像。结果：①125I-c(RGD)2肽标记率达63.92%±6.22%，放射性化学纯度达97.89%±0.23%；放射性核素（125I/131I）标记新型c(RGD)2非小细胞肺癌显像和治疗的实验研究中文摘要125I-c(RGD)2放化纯保持稳定，48h时仍达到97%以上；②加入125I-c(RGD)2肽1h、2h、4h、8h、16h、24h后，125I-c(RGD)2肽A-549细胞的结合率分别为(5.89±0.84)%、(5.61±0.60)%、(4.29±0.84)%、(4.04±0.44)%、(3.49±0.99)%、(3.23±0.56)%，细胞结合率随时间的延长而下降，两者呈负相关(r=-0.813，P<0.05)；③尾静脉注入125I-c(RGD)2肽后，肿瘤放射性较高，注射后1h肿瘤中%ID/g为4.56±1.08；肾脏放射性在各个时间点均最高，表明药物主要通过肾脏排泄。随着时间的延长，体内各器官的放射性摄取均逐渐减少，各器官的T/NT均随时间延长而呈上升趋势；④SPECT平面显像，1h即能显示肿瘤部位，但本底较高，随着时间延长，体内放射性大部分通过泌尿系统排出体外，本底放射性逐渐减少，肿瘤显像更加清晰，2～4h肿瘤显像最清晰，24h后肿瘤仍能较清晰地显像。结论：c(RGD)2肽可被125I稳定标记，125I-c(RGD)2肽对肿瘤αvβ3受体具有高度的选择性及亲和力，并且显像迅速，代谢速度快，有望成为非小细胞肺癌的靶向显像剂。第二部分131I-c(RGD)2肽对肺腺癌细胞A-549杀伤效果观察目的：通过放射性核素131I、新型c(RGD)2及131I-c(RGD)2肽对肺腺癌A-549细胞的抑制作用的研究，验证131I-c(RGD)2肽对非小细胞肺癌靶向治疗作用。方法：①应用氯胺T标记c(RGD)2肽并测定标记率与放射性化学纯度；②实验组加入131I、c(RGD)2肽、131I-c(RGD)2肽(每孔含250μCi131I，6μLc(RGD)2肽，加入生理盐水调成含放射性活度及浓度一致的溶液)，对照组加入20μL生理盐水，并设空白调零组，每孔设6个复孔，采用四甲基偶氮咗盐（MTT）比色法测吸光度（OD）值，测定细胞增殖抑制率(%)=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值×100%；③对照组加入1.0mL生理盐水，实验组分别加入131I、c(RGD)2肽、131I-c(RGD)2肽，用流式细胞仪检测（激发波长Ex=488nm，发射波长Em=530nm）不同药物作用后不同时间对细胞凋亡的影响。结果：①肺腺癌A-549细胞在铺板后前4天呈对数生长趋势，4～6天之间处于平台期，6天后开始下降；②以c(RGD)2肽为原料，进行131I标记，标记率达91.93%±1.7%，放射性化学纯度达99.06%±0.7%；③加入131I、c(RGD)2肽、131I-c(RGD)2肽后，各时间点对照组OD值均高于实验组。加入131I后24h、48h、72hOD值分别是0.224±0.134、放射性核素（125I/131I）标记新型c(RGD)2非小细胞肺癌显像和治疗的实验研究中文摘要0.524±0.061、0.961±0.013；加入c(RGD)2肽后24h、48h、72hOD值分别是0.244±0.310、0.507±0.358、0.968±0.119；加入131I-c(RGD)2肽后24h、48h、72hOD值分别是0.194±0.279、0.408±0.515、0.539±0.143，加药后各组细胞的OD值均随着时间的增加而增高，均与时间成正相关(P<0.01)，加入131I-c(RGD)2肽72小时后，细胞的OD值下降最为明显；④计算加入131I、c(RGD)2肽、131I-c(RGD)2肽作用不同时间对细胞的抑制率。加入131I后24h、48h和72h的抑制率分别为(21.52%±4.71%)、(24.71%±8.81%)、(48.59%±0.70%)；加入c(RGD)2肽后24h、48h和72h的抑制率分别为(14.99%±10.81%)、(27.06±5.15%)、(48.23±0.06%)；加入131I-c(RGD)2肽后24h、48h和72h的抑制率分别为(31.93%±9.80%)、(41.32%±7.40%)、(71.09%±7.65%)；各组的抑制率均随时间延长呈上升趋势，其中131I-c(RGD)2肽作用后各时间点对细胞的抑制率均最高；⑤131I、c(RGD)2肽、131I-c(RGD)2肽各组早期凋亡率均随着时间的延长而增高，其中131I-c(RGD)2肽作用各时间点早期凋亡率均最高。结论：131I-c(RGD)2肽对肺腺癌A-549细胞具有明显的抑制作用，且其抑制作用强于单纯使用131I和c(RGD)2肽,有望成为治疗非小细胞肺癌的新型靶向药物。
【作者】陈青；
【导师】张玮；
【作者基本信息】苏州大学，影像医学与核医学，2014，硕士
【关键词】RGD；非小细胞肺癌；靶向显像；靶向治疗；整合素；αvβ3；

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